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    消除微生物污染

    發(fā)布時間： 2023-01-06　　點擊次數(shù)： 884次

    原理

    通過沖洗單層培養(yǎng)物或通過離心重懸非貼壁細胞，以高濃度抗生素清洗培養(yǎng)物數(shù)次，然后將培養(yǎng)物傳代，用加抗生素的培養(yǎng)基傳三次，再用不加抗生素的培養(yǎng)基傳三次，每次傳代后都要檢測是否污染。

    材料與儀器

    DBSS
    高濃度抗生素培養(yǎng)液
    用于傳代培養(yǎng)的材料 帶有40×或60×物鏡的相差顯微鏡 用于支原體染色的材料

    步驟

    1. 仔細收集污染培養(yǎng)液，如有可能，應(yīng)測試該有機體對一系列抗生素的敏感性，如果做不到，則應(yīng)對培養(yǎng)液進行高壓滅菌或加入次氯酸鹽。

    2. 用 DBSS 沖洗細胞（每一次沖洗可使污染物濃度減少兩個對數(shù)級，除非污染物黏貼在細胞上）。

    (a)對于單層培養(yǎng)物，用 DBSS 沖洗培養(yǎng)物三次，然后用胰蛋白酶處理，再用 DBSS 通過離心與再懸浮清洗細胞兩次以上。

    (b)對于懸浮培養(yǎng)物，通過離心和重懸，用 DBSS 沖洗培養(yǎng)物 5 次。

    3. 將細胞以盡可能低而又合適的細胞濃度接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。

    4. 加入含高濃度抗生素的培養(yǎng)基，每兩天換一次。

    5. 用高濃度抗生素培養(yǎng)基進行傳代培養(yǎng)。

    6. 重復(fù)進行 1~4 的步驟，傳代培養(yǎng)三次。

    7. 移去抗生素，在無抗生素情況下，將這些細胞再進行三次傳代培養(yǎng)。

    8. 用相差顯微鏡及 Hoechst 染色檢査培養(yǎng)物。

    9. 對這些細胞再進行兩個月的培養(yǎng)，不加抗生素，檢査以確定所有污染已被消除。

    常見問題

    一般的原則是應(yīng)將污染的培養(yǎng)物丟棄，而不要試圖去除污染，除非是至關(guān)重要必須保留的細胞系才考慮去除污染。在任何情況下，很難做到完-全消除污染。特別是在酵母污染時，如果試圖去除污染，可能導(dǎo)致產(chǎn)生更頑固的對抗抗生素的細胞。


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