聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

什么是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)？

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是一項(xiàng)用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它是在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下，將該段DNA擴(kuò)增至足夠數(shù)量，以便進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析。

影響PCR實(shí)驗(yàn)的因素之一 —— 耗材

在PCR實(shí)驗(yàn)中，影響擴(kuò)增效果的因素有很多。我們能想到的有dNTP的質(zhì)量與濃度、模板核酸的量與純化程度、引物的設(shè)計(jì)、DNA聚合酶的濃度、擴(kuò)增長(zhǎng)度等問(wèn)題。

實(shí)際上，使用的耗材也可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而這往往被我們所忽略。因此在選擇實(shí)驗(yàn)耗材前，我們還需要了解PCR耗材相關(guān)的特性和術(shù)語(yǔ)。

如何選擇合適的PCR耗材

品牌：鋼士特GUNSTER(中國(guó)臺(tái)灣)

名稱：PCR八聯(lián)排管(管蓋分離)

貨號(hào)：MB-P08B

規(guī)格：0.2ml  平蓋

品牌：鋼士特GUNSTER(中國(guó)臺(tái)灣)

名稱：PCR八聯(lián)排管(管蓋分離)

貨號(hào)：MB-P08D

規(guī)格：0.2ml  凸蓋

品牌：鋼士特GUNSTER(中國(guó)臺(tái)灣)

名稱：PCR 96孔板

貨號(hào)：MB-P96

規(guī)格：0.2ml  無(wú)裙邊  透明

半裙邊板：可適配標(biāo)簽或應(yīng)用條碼，適合自動(dòng)化應(yīng)用，且有著較好的移液穩(wěn)定性。

全裙邊板：非常適用于自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，也可適配標(biāo)簽及應(yīng)用條碼。機(jī)械強(qiáng)度較好，可適用于凸出模塊的PCR儀，且移液過(guò)程中穩(wěn)定性高。

PCR技術(shù)的臨床應(yīng)用

單克隆抗體技術(shù)曾使免疫學(xué)理論與實(shí)踐有了新的突破，近幾年來(lái)PCR技術(shù)使分子生物學(xué)及相關(guān)學(xué)科發(fā)生了一次方法學(xué)的革命。在不到10年的時(shí)間內(nèi)，在以下幾個(gè)領(lǐng)域中PCR技術(shù)已具有實(shí)用價(jià)值，且其應(yīng)用范圍正在不斷擴(kuò)大中。

1、遺傳病的產(chǎn)前診斷

用胎兒羊膜細(xì)胞，羊水或甚至母血可以檢查胎兒的性別，這在與性染色體關(guān)聯(lián)遺傳病診斷中是必要的。對(duì)于高發(fā)的遺傳病，如地中海貧血、鐮刀狀細(xì)胞貧血、凝血因子缺乏、DMD等已在臨床應(yīng)用多年，為優(yōu)生優(yōu)育作了貢獻(xiàn)，對(duì)于有遺傳傾向的疾病尤其是老年性疾病，如糖尿病、高血脂癥、甚至腫瘤中的一部分，均是當(dāng)前研究的重點(diǎn)，近期內(nèi)可望有突破。

2、致病病原體的檢測(cè)

這些外源入侵的基因，一旦闡明其部分核酸序列，就可以設(shè)計(jì)引物或探針，用PCR、PT-PCR或雜交方法來(lái)檢測(cè)，其范圍包括細(xì)菌、病毒、原蟲(chóng)及寄生蟲(chóng)、霉菌、立克次體、衣原體和支原體等一切微生物，PCR診斷的特點(diǎn)是可以選擇其基因中的保守區(qū)作通用檢測(cè)，也可以選定差異較大的基因部位作分型檢測(cè)。既可以做一病原體的專用檢測(cè)，也可以將有關(guān)病毒、細(xì)菌中不同的品種作一次多元檢測(cè)。而且檢測(cè)的靈敏度和特異性都遠(yuǎn)高于當(dāng)前的免疫學(xué)方法，所需時(shí)間也已達(dá)到臨床要求，這對(duì)于難于培養(yǎng)的病毒（乙肝），細(xì)菌（如結(jié)核、厭氧菌）和原蟲(chóng)（如梅毒螺旋體）等來(lái)說(shuō)尤為適用。

3、癌基因的檢測(cè)和診斷

雖然對(duì)癌基因的研究大部分還屬于基礎(chǔ)階段，但癌變是由基因變異所導(dǎo)致的這一基本事實(shí)已無(wú)庸置疑，所以癌基因、抗癌基因入抗轉(zhuǎn)移基因的研究，離開(kāi)分子水平的診斷手段是無(wú)法進(jìn)行的，臨床上已可應(yīng)用的例子有白血病殘留細(xì)胞的定量（包括慢粒和急粒），肺癌中P53及Rb等抗癌基因的失活，神經(jīng)質(zhì)瘤N-myc基因的激活和表達(dá)。通過(guò)原位雜交觀察特定癌基因及抗轉(zhuǎn)移基因的植入和反義寡核苷酸對(duì)強(qiáng)表達(dá)癌基因的阻斷均已成為近代基因治療的著眼點(diǎn)。

4、DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子關(guān)系鑒別及法醫(yī)物證

這一部分所矚目的課題已經(jīng)在某些國(guó)家取得法律認(rèn)可。肌紅蛋白小衛(wèi)星基因，β-珠蛋白基因、ApoB基因等的多肽性和重復(fù)次數(shù)的差異都被應(yīng)用于鑒定，其靈敏度已達(dá)到一根頭發(fā)、一個(gè)細(xì)胞取得個(gè)體特征圖譜，這一領(lǐng)域也已發(fā)展到骨髓或臟器移植配型及動(dòng)物種系的研究中。

5、動(dòng)、植物檢疫

靈敏、特異、快速診斷檢測(cè)方法是我國(guó)進(jìn)出口口岸的門(mén)衛(wèi)，檢查出入國(guó)境的人員、動(dòng)、植物（種畜、種籽）等是否攜帶烈性傳染?。ò?、動(dòng)物病毒、植物病毒等）病原體，食品、飼料等是否帶沙門(mén)氏菌等均需要基因診斷手段將這些病菌拒之于國(guó)境之外，是提高我國(guó)綜合國(guó)力的必要保證。

6、高科技生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

在轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物中檢查植入基因的存在。PCR技術(shù)尚可應(yīng)用于基因拼接、測(cè)序等領(lǐng)域。